Jensen Ross Ackles wurde am 1. März 1978 in Dallas, Texas, als Sohn von Roger Alan Ackles und Donna Joan Shaffer geboren. Schon im zarten Alter von vier Jahren stand Ackles kurzzeitig als Model auf der Bühne und sechs Jahre später probierte er sich ein weiteres Mal. Seine Karriere begann 1996, nachdem er den Abschluss an der Lloyd V. Berkner High School Richardson geschafft hatte.
Von 1997 bis 2000 war Jensen als Eric Brady in der Seifenoper "Zeit der Sehnsucht" zu sehen und erhielt auch Gastrollen in "Dark Angel", "Eine himmlische Familie", "Dawson's Creek" und "Smallville". In jeder dieser vier Serien spielte er ein Jahr lang mit und erhielt 2005 schlussendlich im US-Quotenhit "Supernatural" eine Hauptrolle. In "Supernatural" übernahm Ackles neben Serienkollege Jared Padalecki die Rolle des Dean Winchesters, der auf der Suche nach seinem Vater auf Dämonen aller Art trifft.
Natürlich spielte Jensen auch in anderen Produktionen mit. So auch in "The Plight of Cownana", wobei er hier auch als Regieassistent und ausführender Produzent tätig war. Im Film "Ten Inch Hero" spielte er Priestly und in "Devour" war er als Jake Gray zu sehen.
Jensen ist sehr sportlich und spielte auch schon während seiner Schulzeit begeistert Basketball. Seine Lieblingsband sind die Dallas Cowboys und neben seinen drei Emmy-Nominierungen holte er sich 1998 den "Soap Opera Digest Award", da er zum besten männlichen Newcomer gekürt wurde.